本病诊断的确定主要根据接触史(有不洁性交史)、临床表现(在生殖器部位出现过表浅糜烂与溃疡。1～4周后出现两侧腹股沟淋巴结炎，有槽沟征及喷水壶状多数瘘管，痊愈后留疤痕。)和实验室检查。
诊断性病淋巴肉芽肿，实验室检查是必需的。首先要作血清学检查，它对诊断和判定疗效都是必要的。有条件的要作衣原体的培养，进一步确定衣原体的血清型。此外，Frei皮肤试验、组织病理检查可根据具体情况进行。
诊断性病淋巴肉芽肿需作的血清学检查为：
(1)补体结合试验
所用的抗原是由瑞士的微生物研究所生产的群抗原，是本病重要的血清学诊断方法，能检测两种抗体：砂眼衣原体抗体和鹦鹉热衣原体抗体。因为人群中常见有衣原体感染，所以本试验阳性有助于诊断，但不能靠其结果决定诊断。患者血清滴度高，多为1:64或以上，而结膜炎砂眼衣原体感染时血清滴度低(1:16—1:32)。一般而言，本试验血清滴度1:8或1:6对本病诊断有提示意义，而1:64或以上则有诊断意义。恢复期患者血清滴度降低。此外，血清试验的结果不完全与抗生素治疗反应相平行。
(2)微量免疫荧光试验
此试验有一定的敏感性和特异性，比补体结合试验更为敏感和特异，能检测不同血清型衣原体特异性抗体，可用来鉴别本病和其他衣原体感染。通常滴度大于512才有意义。但因试验条件的限制，目前尚难以广泛应用。
(3)对流免疫电泳法
此为检查衣原体抗体的一种简便、快速和特异的试验。约有90％的患者能被本试验证实。
(4)病原体培养
宜取肿大的淋巴结穿刺物接种在鸡胚卵黄囊，或做组织(细胞)培养或小白鼠颅内接种。阳性者有诊断价值。另需做细菌培养和涂片革兰氏染色，以除外葡萄球
